微生物的培养与应用（重点突破）

1. 常见问题
培养基配置的基本步骤：(1)计算、称量；(2)溶化；(3)调pH；(4)分装(分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染。分装三角烧瓶的量以不超过三角烧瓶容积的一半为宜，试管则不超过5(1))；(5)加塞；(6)包扎；(7)灭菌(包上牛皮纸或双层报纸，放入高压蒸气灭菌锅，压力为100kPa、温度为121 ℃，灭菌15～30 min；培养皿则包裹后，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2 h)；(8)倒平板(培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板)或搁置斜面(不超过试管的2(1))；(9)无菌检查(将灭菌的培养基放入37 ℃的温室中培养24～48小时后观察，以检查灭菌是否彻底)。
2. 易错提醒
(1) 灼烧接种环：操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养基；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，目的是能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。
(2)  稀释操作：①将分别盛有9 mL水的6支试管灭菌，并按10到106的顺序进行编号；②用移液试管吸取1 mL培养的菌夜，注入10倍稀释的试管中．用手指轻压移夜管上的橡皮，吹吸三次，使菌液与水充分混匀；③从10倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中，重复第二步的混匀操作，以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。