基因工程和蛋白质工程（重点突破）

1. 常见问题
(1) PCR反应的原理及过程。
①PCR原理：在一定的缓冲溶液中通过控制温度并提供模板和原料，使DNA复制在体外反复进行。
②PCR过程：
a．变性：当温度上升到90～95 ℃时，双链DNA解聚为单链。
b．复性：当温度下降到55～65 ℃时，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。
c．延伸：当温度上升到70～75 ℃左右时，溶液中的四种脱氧核苷酸在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。
2. 易错提醒
(1) 几种酶的比较。
①限制性内切酶：作用于DNA分子，切割磷酸二酯键，形成黏性末端或平末端。
②DNA连接酶：作用于DNA分子片段，连接磷酸二酯键，形成重组DNA分子。
③聚合酶：作用于脱氧核苷酸，连接磷酸二酯键，形成新的DNA分子。
④解旋酶：作用于DNA分子，作用于氢键，形成DNA分子的单链。
(2) 限制酶。
①一种限制酶通常只识别一种特定的碱基序列，但是有少数限制酶却可以识别不止一种碱基序列。
②不同限制酶也可以识别同一碱基序列；
③不同限制酶识别的碱基序列虽然不同，但切出的末端也可能相互连接。
3. 解题技巧
(1) PCR过程，DNA变单链不需要解旋酶，高温使其变成单链；PCR过程需要耐高温的DNA聚合酶。
(2) 基因工程育种的原理是基因重组。
(3) 构建基因表达载体是基因工程的核心。